實驗條件的選擇

在ELISA中，進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進(jìn)行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定（見酶標(biāo)記抗體部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法"（包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度）在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

進(jìn)口包裝：

檢測范圍和靈敏度不同。用量少時，可采用分裝。在早期，它的耐用性不是很好。

試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線最高點OD值為2.0±0.2，零孔OD值控制在0.10以下。

試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R≥0.98。

試劑盒重現(xiàn)性好，板內(nèi)及板間變異系數(shù)<9%。

試劑的成分均給予20%的余量，以確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能出現(xiàn)試劑不足的情況。

檢測抗體和酶聯(lián)物的稀釋度適當(dāng)（均為1:30），方便檢測人員準(zhǔn)確進(jìn)行稀釋工作，保證檢測結(jié)果的重復(fù)性。

Interleukin-6 是一種細(xì)胞因子，已被鑒定為 B 細(xì)胞分化因子。它是一種抗體形成系統(tǒng)，其生理特性，如誘導(dǎo)肝細(xì)胞中的急性蛋白質(zhì)合成和基于與白細(xì)胞介素3協(xié)同作用的生長刺激，也備受關(guān)注。并且已經(jīng)證實白細(xì)胞介素6與病理學(xué)之間存在穩(wěn)定的相關(guān)性。例如，有報道稱各種疾病的生長因子是白介素6，骨髓瘤細(xì)胞可以合成白介素6并表達(dá)白介素6受體。此外，白細(xì)胞介素6在多種炎癥性疾病和自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。本試劑盒可高靈敏度檢測小鼠血清和細(xì)胞基質(zhì)上清液中的白細(xì)胞介素6。原理 本試劑盒使用兩種特異性抗體，洗板后加入TMB底物溶液顯色，顯色強度與小鼠體內(nèi)IL-6量成正比。檢測范圍 10.94 700 pg/mL 預(yù)期用途

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

同產(chǎn)品展示：